4月8日，中国食品药品检定研究院发布《国家药品抽检探索性研究情况（第六期）》，其中涉及当归养血丸品种中阿胶的鉴别方法和阿胶特征多肽的含量测定方法；妇康宝口服液中阿胶液质鉴别方法及阿胶中掺伪马源成分的液质鉴别方法；定坤丹中驯鹿源特征肽检查方法、马源寡肽A检查方法； 龟甲胶特征离子、阿胶特征离子的鉴别方法和牛皮源、驴皮源、猪皮源和马皮源成分的检查方法等。
按照国家药品监督管理局药品监督司的要求，各承检机构基于法定标准检验，以问题为导向，针对可能影响药品内在质量的处方、原辅料、生产工艺、包装材料等方面的相关因素，开展探索性研究，建立或参照国家药品标准以外的检验项目和检测方法，深入挖掘药品质量风险。
其中，深圳市药品检验研究院通过探索性研究，采用高效液相色谱-质谱法，建立了当归养血丸品种中阿胶的鉴别方法和阿胶特征多肽的含量测定方法，提示有关生产企业可参考关注药品相关项目；
（1）当归养血丸中阿胶的高效液相色谱-质谱法鉴别
取本品适量，研细，取1.70g，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟使溶散，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，离心（3500转/分钟）5分钟，将上清液转移至另一离心管中，再离心（3500转/分钟）5分钟，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，再用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析级胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml含1mg的溶液，临用新制）10μl，摇匀，37℃恒温酶解12小时，作为供试品溶液。另取阿胶对照药材0.1 g，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟，使样品完全溶解，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，自“用0.22μm微孔滤膜滤过”起，同法制成对照药材溶液。照高效液相色谱-质谱法（《中国药典》2015年版四部通则0512和通则0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3m1。采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择质荷比（m/z）539.8（双电荷）→612.4和539.8（双电荷）→923.8作为检测离子对。取阿胶对照药材溶液，进样5μl，按上述检测离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3:1。
吸取阿胶对照药材溶液 5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。以质荷比（m/z）539.8（双电荷）→612.4和539.8（双电荷）→923.8离子对提取的供试品离子流色谱中，应同时呈现与阿胶对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。
（2）高效液相色谱-质谱法测定当归养血丸中阿胶特征多肽的含量
【含量测定】阿胶 照《中国药典》2015年版四部高效液相色谱-质谱法（通则 0512 和通则 0431） 测定。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3m1。
采用三重四级杆质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI）正离子模式下多反应监测（MRM），监测离子对见表：
理论板数按驴源多肽A1峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备 取驴源多肽A1对照品和驴源多肽A2对照品适量，精密称定，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml各含2.5μg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末约1.70g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1%碳酸氢铵溶液25ml，称定重量，超声处理60分钟，再称定重量，用1%碳酸氢铵溶液补足减失的重量，离心（3500转/分钟）5分钟，将上清液转移至另一离心管中，再离心（3500转/分钟）5分钟，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，再用0.22μm微孔滤膜滤过，精密量取续滤液1ml，置5ml量瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析级胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml含1mg的溶液，临用新配）1ml，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，37℃恒温酶解12小时，滤过，取续滤液，即得。
测定法 精密量取对照品溶液1、2、5、10、20、25ml，分别置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，制成标准曲线溶液。分别精密吸取不同浓度的标准曲线溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，以对照品峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标制备标准曲线。从标准曲线读出供试品溶液中驴源多肽A1和驴源多肽A2的浓度，计算，即得。
本品每1g含阿胶以驴源多肽A1和驴源多肽A2的总量计，不得少于78μg。
天津市药品检验研究院通过探索性研究，建立了妇康宝口服液中阿胶液质鉴别方法及阿胶中掺伪马源成分的液质鉴别方法，提示有关生产企业可参考该方法关注药品中阿胶品质的项目；
妇康宝口服液中阿胶检验方法
精密吸取本品1ml，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，充分摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液10μl（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml中含1mg的溶液，临用前现配），摇匀，37℃恒温酶解12小时，作为供试品溶液。另取阿胶对照药材0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，同法制成对照药材溶液。照高效液相色谱-质谱法（中国药典2015年版四部通则0512和0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3ml；采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择质荷比（m/z）539.8（双电荷）→612.4和m/z 539.8（双电荷）→923.8作为检测离子对。取阿胶对照药材溶液，进样5μl，按上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3：1。
吸取供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。 以质荷比（m/z）539.8（双电荷）→612.4和m/z 539.8（双电荷）→923.8离子对提取的供试品离子流色谱中，应同时呈现与对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。
妇康宝口服液中阿胶掺伪马源成分检验方法
精密吸取本品1ml，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，充分摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，加入胰蛋白酶溶液（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1 mL中含2 mg的溶液，临用前现配）10 μL，混匀，37 ℃恒温酶解12小时，作为供试品溶液。另取阿胶对照药材0.10 g，置50 mL量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40 mL，超声处理30 min，使样品完全溶解，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，作为阿胶基质溶液。再取马源寡肽A对照品适量，精密称定，加阿胶基质溶液，制成每1mL含0.2μg马源寡肽A的对照品溶液，摇匀，作为对照品溶液。照高效液相色谱-质谱法（中国药典2015年版四部通则0512和0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为0.3 mL/min；以质谱作为检测器，电喷雾离子源：ESI+，选择质荷比（m/z）386.3（双电荷）→377.2和m/z386.3（双电荷）→322.2作为检测离子对进行多反应监测（MRM）。对照品溶液中马源寡肽A的色谱峰m/z386.3（双电荷）→377.2、m/z 386.3（双电荷）→322.2的信噪比均应大于10:1。
分别吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。①供试品溶液的提取离子流色谱中，未同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，视为未检出；②供试品溶液的提取离子流色谱中，同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品溶液色谱中m/z386.3（双电荷）→377.2的色谱峰面积值不大于参比溶液中相应的峰面积值者，视为未检出；③供试品溶液的提取离子流色谱中，同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品溶液色谱中m/z386.3（双电荷）→377.2的色谱峰面积值大于对照品溶液中相应的峰面积值者，视为检出。
供试品溶液的提取离子流色谱中，应不得检出与对照品溶液色谱相应的色谱峰。
山东省食品药品检验研究院通过探索性研究，建立了定坤丹中驯鹿源特征肽检查方法、马源寡肽A检查方法，提示有关生产企业可参考该方法关注鹿茸药材质量问题；
定坤丹中驯鹿源特征肽检查方法
【检查】 驯鹿源成分 照高效液相色谱（中国药典2015年版通则0512）和质谱法（中国药典2015年版通则0431）测定。
色谱、质谱条件与系统适用性实验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm）；以乙腈为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3m1。采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择质荷比（m/z）575.8（双电荷）→894.6和m/z575.8（双电荷）→570.3作为检测离子对。取驯鹿茸药材参比溶液进样5μl，选择上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3:1。
驯鹿源成分参比溶液的制备 取相当于大蜜丸3g时处方中鹿茸和鹿角霜总量的5%驯鹿茸（即取驯鹿茸9mg、7.7mg）加入缺鹿茸鹿角霜的大蜜丸阴性样品3g，制得参比样品，加入50ml变性缓冲液和5ml二硫苏糖醇溶液，摇匀，置90℃处理4h，取出放冷至室温，离心（12000rpm，10min）。取上清液500μl，加入100μl碘代乙酰胺溶液，避光反应30min，混匀，离心（12000rpm，10min），取上清液100μl，加入900μl碳酸氢铵溶液和5μl胰蛋白酶溶液，37℃酶解15min，再置90℃处理10min，取出放冷至室温，离心（12000rpm，10min），取上清液，即得。
供试品溶液的制备 取本品大蜜丸适量，剪碎，取3.0g，精密称定，加水15ml，振摇20分钟，离心（4000rpm，10min），弃去上层水液，如法清洗2次。所得沉淀自“加入50ml变性缓冲液和5ml二硫苏糖醇溶液”起，照驯鹿源成分参比溶液的制备方法同法操作，即得。
测定法 分别精密吸取参比溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱-质谱联用仪，测定，即得。
判定原则 （1）供试品的提取离子流色谱中，未同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，视为未检出；（2）供试品的提取离子流色谱中，同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 575.8（双电荷）→894.6的色谱峰面积值小于参比溶液中相应的峰面积值者，视为未检出；（3）供试品的提取离子流色谱中，同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 575.8（双电荷）→894.6的色谱峰面积值大于参比溶液中相应的峰面积值者，视为检出。
结果判定 供试品的提取离子流色谱中，应不得检出与参比溶液色谱相应的色谱峰。
定坤丹中马源寡肽A检查方法
【检查】 马皮源成分 照高效液相色谱（中国药典2015年版通则0512）和质谱法（中国药典2015年版通则0431）测定。
色谱、质谱条件与系统适用性实验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径为2.1mm）；以0.1%甲酸乙腈溶液为流动相A，以0.1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速为每分钟0.3m1。采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择质荷比（m/z）386.4（双电荷）→377.3和386.4（双电荷）→322.3作为检测离子对。取马皮源成分参比溶液5μl，加1%碳酸氢铵溶液稀释至100μl，混匀，进样5μl，选择上述离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于10:1。
马皮源成分参比溶液的制备 取马源寡肽A对照品适量，精密称定，加阿胶基质溶液（取阿胶对照药材粉末0.1g，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟，使样品完全溶解，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，即得），制成每1ml含0.2μg马源寡肽A的对照品溶液，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析级胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1μl中含1μg的溶液，临用前现配）10μl，摇匀，37℃恒温酶解12小时，即得。
供试品溶液的制备 取本品大蜜丸适量，剪碎，取6.0g，精密称定，置50ml量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液40ml，超声处理30分钟使溶散，加1%碳酸氢铵溶液稀释至刻度，摇匀，离心（转速为每分钟5000转）5分钟，取上清液，自“用0.22μm微孔滤膜滤过”起，照马皮源成分参比溶液的制备方法同法操作，即得。
测定法 分别精密吸取参比溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱-质谱联用仪，测定，即得。
判定原则 （1）供试品的提取离子流色谱中，未同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，视为未检出；（2）供试品的提取离子流色谱中，同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 386.4（双电荷）→377.3的色谱峰面积值不大于参比溶液中相应的峰面积值者，视为未检出；（3）供试品的提取离子流色谱中，同时出现与参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中m/z 386.4（双电荷）→377.3的色谱峰面积值大于参比溶液中相应的峰面积值者，视为检出。
结果判定 供试品的提取离子流色谱中，应不得检出与参比溶液色谱相应的色谱峰。
广东省药品检验所通过探索性研究，建立鹿角胶、龟甲胶特征离子的鉴别方法和牛皮源成分、驴皮源成分、猪皮源成分、马皮源成分的检查方法，提示有关生产企业可参考该检验方法关注龟甲胶、鹿角胶的投料问题；
龟甲胶特征离子、阿胶特征离子的鉴别方法和牛皮源、驴皮源、猪皮源和马皮源成分的检查方法
【鉴别】 取本品适量，粉碎成粉末（过三号筛），取约1g（约相当于含龟甲胶、鹿角胶各0.1g的量），精密称定，置50ml容量瓶中，加水10ml，80℃加热45分钟，冷却后，再加0.5g碳酸氢铵溶液，加水至40ml，超声处理40分钟，加水至刻度，摇匀，用0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液10μl（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml中含1mg的溶液，临用时配制），摇匀，37℃恒温酶解12小时，作为供试品溶液。另取龟甲胶对照药材、鹿角胶对照药材各0.1g，同法分别制成龟甲胶对照药材溶液和鹿角胶对照药材溶液。照高效液相色谱法-质谱法（中国药典2015年版通则0512和通则0431）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径2.1mm）；以0.1%甲酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表进梯度洗脱；流速为每分钟0.3ml。以三重四级杆串联质谱仪检测；电喷雾正离子模式（ESI+），多反应监测（MRM），以m/z631.3（双电荷）→546.4和m/z631.3（双电荷）→921.4作为龟甲胶的检测离子对；以m/z765.4（双电荷）→554.0和m/z765.4（双电荷）→733.0作为鹿角胶的检测离子对。分别取龟甲胶对照药材溶液、鹿角胶对照药材溶液，各进样5μl，按上述检测离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3︰1。
吸取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。以m/z631.3（双电荷）→546.4和m/z631.3（双电荷）→921.4离子对提取的供试品离子流色谱图中，应同时呈现与龟甲胶对照药材色谱保留时间一致的色谱峰；以m/z765.4（双电荷）→554.0和m/z765.4（双电荷）→733.0离子对提取的供试品离子流色谱图中，应同时呈现与鹿角胶对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。
【检查】 牛皮源成分、驴皮源成分、马皮源成分、猪皮源成分 照高效液相色谱法-质谱法（中国药典2015年版通则0512和通则0431）试验。
色谱、质谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（色谱柱内径2.1mm）；以0.1%甲酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱：0～5分钟，A 95%，B 5%；5～10分钟，A 95%→80%，B 5%→20%；10～12分钟，A 80%→50%，B 20%→50%。流速为每分钟0.25ml；柱温为40℃。以三重四级杆串联质谱仪检测；电喷雾离子源：ESI+，多反应监测（MRM），以m/z 641.3（双电荷）→726.2和m/z 641.3（双电荷）→783.3作为牛皮源成分的检测离子对；以m/z 539.8（双电荷）→612.4和m/z 539.8（双电荷）→924.5作为驴皮源成分的检测离子对；以m/z 386.4（双电荷）→377.3和m/z 386.4（双电荷）→322.3作为马皮源成分的检测离子对；以m/z 774.5（双电荷）→977.8和m/z 774.5（双电荷）→1034.6作为猪皮源成分的检测离子对。
对照药材溶液的制备 取黄明胶对照药材、阿胶对照药材、马皮胶工作对照药材和新阿胶对照药材各0.1g，精密称定，分别置50ml容量瓶中，加1%碳酸氢铵溶液至40ml，超声处理30分钟，加水至刻度，摇匀，用0.22 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液100μl，置微量进样瓶中，加胰蛋白酶溶液10μl（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氢铵溶液制成每1ml中含1mg的溶液，临用时配制），摇匀，37℃恒温酶解12小时，作为对照药材溶液。制成黄明胶对照药材溶液、阿胶对照药材溶液、马皮胶药材溶液和新阿胶胶对照药材溶液。
供试品溶液的制备 取〔鉴别〕项下的供试品溶液，即得。
测定法 分别吸取供试品溶液及上述四种对照药材溶液各 5μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，即得。
探索性研究结果不用于判定药品是否合格，而是针对发现的问题，为加强药品监管促进药品质量的不断提升提供技术支持。便于药品生产企业对相关药品质量风险问题采取控制措施，主动落实药品生产企业的主体责任。
