阿胶的药理学研究证明： 阿胶对哮喘大鼠气道炎症及外周血Ⅰ型/Ⅱ型T辅助细胞因子的影响
一、材料
动物：健康雄性 Wistar大鼠60只，体重220～250g。
药物及试剂：阿胶浓度为0.15g/mL；斯奇康0.5mg/mL；卵蛋白，大鼠
L-4ELISA试剂盒（灵敏度10pg/mL）和IFN- γ ELISA试剂盒(灵敏度18pg/mL)。
主要仪器：雾化吸入器，台式离心机，550型酶标阅读仪。
二、方法
① 哮喘模型的制备及分组模型制备：60只 Wistar大鼠，随机分为6组，每组10只。
A组：NS对照组；
B组：低剂量阿胶组（浓度为0.017g/mL）
C组：中剂量阿胶组（浓度为0.05g/mL）；
D组：高剂量阿胶组（浓度为0.15g/mL）；
E组：斯奇康组（肌内注射0.05mL，每毫升含卡介菌多糖0.35mg，隔日1次，其余5组用0.05mL生理盐水代替）；
F组：哮喘对照组。
B、C、D、E、F组第1天以1mg卵蛋白和1mLAl（OH）₃凝胶的混合液在胸部、前肢内侧分四个部位皮下注射（每个部位0.1mL）和腹腔注射（0.6mL），第7天重复致敏1次；第15～28天，每天采用5％卵蛋白生理盐水溶液雾化吸入进行激发，每天20分钟，连续1周，缓解1周，再激发1周。
A组用生理盐水分别代替卵蛋白与卵蛋白生理盐水溶液进行致敏和激发。从
激发后的第1天起，B、C、D组以2mL阿胶液灌胃，A、E、F组以2mL生理
盐水灌胃，连续3周。
②标本的采集：最后一次激发后，用戊巴比妥钠麻醉大鼠，进行开胸心脏采血，并立即剪取右肺中叶用HE染色，观察嗜酸性粒细胞浸润情况。血液在4℃环境下进行2000转/分离心20分钟，取上清液分装，-80℃低温冰箱保存待测。
③细胞因子的检测（IL-4水平的检测）：按试剂盒说明进行，在抗IL-4单克隆抗体包被的酶标板上，加50μL稀释液（RDIW）到每个孔，加50μL标准品、对照品、样本到每个孔（保证在15分钟之内完成），轻摇板1分钟，
封膜，室温孵育2小时。洗板5次，加入100μL IL-4 conjugate（二抗）到每孔，封膜，室温孵育2小时。重复洗板5次，加100μL颜色反应液到每孔，室温孵育30分钟，避光。加100μL中止液到每孔，轻摇板1分钟，并在30分钟内检测。IFNーγ检测步骤基本同上，按说明书操作进行。
④肺组织嗜酸性细胞计数：HE染色，采用与图像分析相结合的方法，每个标本随机选取5个视野，显微镜下观察（放大400倍），计数嗜酸性粒细胞，取其平均数。
⑤统计方法：采用SPSS11.5软件，数据以均值±标准差(X▔±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析( ANOVA)，方差不齐时用秩和检验。P﹤0.05时，差异有显著性。
三、结果
血清中IFN-γ和IL-4的水平与NS对照组相比：哮喘组外周血中IFN-γ水平显著降低，而IL-4水平虽有升高趋势，但并未显示出统计学差异。与哮喘组相比，各剂量阿胶组和斯奇康组大鼠外周血IFN-γ水平虽有升高态势，但均未显示出统计学差异。低、中剂量阿胶组和斯奇康组外周血中IL-4水平均显著降低。高剂量阿胶组虽有降低趋势，但无统计学意义。与NS对照组比较，哮喘组大鼠肺组织EOS浸润程度明显加重；与哮喘对照组相比，低、中剂量阿胶组与斯奇康组大鼠肺组织EOS浸润明显减轻(P＜0.01)，而高剂量阿胶组未见显著变化。
模型评价:
①症状改变：所有模型大鼠均出现喷嚏、咳嗽、呼吸急促、弓背滞伏症状，大部分大鼠可听见明显的哮鸣音。而生理盐水对照组无明显异常行为，提示造模成功。
②病理变化：正常大鼠肺组织：支气管黏膜无炎症，未见嗜酸性粒细胞，支气管壁平滑肌无增生，管腔内无炎性渗出，支气管黏膜无水肿。哮喘组大鼠肺组织：小支气管平滑肌增生，大量嗜酸性细胞等炎细胞浸润，黏膜下水肿。斯奇康治疗组：轻度炎症，少量嗜酸性粒细胞浸润，无平滑肌增生和炎性渗出及水肿。低剂量阿胶组：支气管黏膜下淋巴小结形成，但无嗜酸性细胞，管腔内也无炎性渗出，支气管平滑肌无增生。中剂量阿胶治疗组：炎症（±），见淋巴小结，少量嗜酸性细胞浸润，无炎性渗出及水肿，可见平滑肌增生。高剂量阿胶组：炎症（++），少量嗜酸性粒细胞浸润，炎性渗出及水肿（-），平滑肌增生（+）。
四、讨论
哮喘患者存在着Th1/Th2失衡，即Th2的数目增多或功能亢进、Th1亚群数目减少或功能低下。因此，通过纠正Th亚群的失衡来实现对哮喘的治疗，将为治愈哮喘开辟一条新的道路。
免疫学上一般以IFN-γ和IL-4分别作为Th1和Th2细胞的特征性细胞因子，通过检测这两种细胞因子以了解Th1和Th2功能状态。我们检测哮喘大鼠血液中这两种细胞因子的水平，以反映Th1/Th2的平衡状态，并观察阿胶和斯奇康对其功能状态的影响。
阿胶是补益类中药，具有补血滋阴的作用，同时具有“止嗽下气”的作用。
本研究结果显示，与正常对照组相比，哮喘模型组血清中IFNーγ水平明显降低，IL-4水平有升高趋势，提示Th1/Th2失衡可能在哮喘发病中起着重要作用。
我们也同样观察到，采用阿胶和斯奇康治疗，可以使血清中IL一4水平明显降低，IFN-y水平也有升高趋势，说明阿胶可能主要通过抑制Th2型细胞因子影响Th细胞因子的平衡。同时，肺组织嗜酸性粒细胞浸润程度也得到不同程度的降低。
由实验结果可知，阿胶和斯奇康能有效降低哮喘大鼠血清中IL-4水平，说明两种药物可能具有抑制Th2细胞亚群，从而调节Th1/Th2型细胞平衡的作用，并能减轻肺和支气管嗜酸性细胞炎性浸润。
但在此研究中，阿胶和斯奇康均未显示出明显增强Th1型细胞因子的作用，阿胶在高剂量时也未显示出抑制Th2型细胞因子的作用，这与中医学理论中补益药物有碍脾胃运化，不宜过量服用是不谋而合的。
